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Tali® 이미지 기반 세포분석기- 형광 단백질 발현 관찰

740 views · Published 7 December 2012 · 4:02 · Indexed 7 October 2026

Channel: Thermo Fisher Scientific · 2012 · Science & Technology

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http://www.lifetechnologies.com/tali 을 방문하시면 더 많은 정보를 보실 수 있습니다.
이 비디오는 GFP를 reporter유전자로 사용할 때Tali® 이미지 기반 세포분석기를 사용해transfection efficiency를 빠르고 정확하게 구하는 과정을 보여줍니다.

과학자인 Chris는 GFP tagging된 단백질을 세포에 transfection 하였고 transfection efficiency를 구하고자 합니다. Tali® 이미지 기반 세포분석기를 사용하여 transfection 된 세포의 비율과 살아있는 세포의 비율을 알아볼까요.

Chris가 최근 transfection에서 새로 조제준비한 샘플액을 가져옵니다. 이 실험에서는  GFP를 reporter 유전자로 사용했기 때문에 Tali® Dead Cell Red Viability 키트를 사용할 것입니다. RFP가 reporter 유전자인 경우에는 같은 프로토콜로 Tali® Dead Cell Green 키트를 사용할 수 있습니다.
Tali® Dead Cell Red assay는 세포 집단에서 죽은 세포를 확인할 수 있는 간편한 Propidium Iodide 용액입니다. 이 assay는  세포 농도 약 500,000 ~ 5,000,000 cells/mL의 현탁액에서 작업이 가능하기 때문에 농도가 정확할 필요는 없습니다. 샘플 100 µL를 마이크로원심분리 시험관에 넣고 Dead Cell Red 시약 1 μL를 넣습니다. 암소에서5분 간 배양합니다.
이제 이 샘플은 Tali® 기기 분석 준비가 완료되었습니다. 슬라이드 챔버마다 샘플 25 μL를 주입합니다. 샘플이 들어있는 챔버를 기기 반대 방향으로 하여 슬라이드를 슬라이드 포트에 넣습니다.
터치 스크린을 이용해 Green/Red를 누른 후 Green + Red 버튼을 누릅니다. 이 assay에서  Green은 GFP, Red는 propidium iodide를 나타냅니다. 
샘플 시리즈 이름 입력 창이 나옵니다.  샘플 이름은 여기에서 입력하거나 나중에 입력할 수 있습니다.
이제 스크린에서 "샘플 삽입(press to insert sample)" 버튼을 누르면 샘플이 기기 안에 들어가고 세포의 라이브 영상을 볼 수 있습니다. 스크린에 화면이 나오면 기기 오른쪽에 있는 이미지 조절 손잡이를 이용해 세포 초점을 맞춥니다. 초점이 잘 맞추어진 이미지에는 균일하게 어두운 세포가 밝은 후광으로 둘러싸입니다.
확보할 보기 영역 수를 규정하려면 "확보 이미지 수(# of images tocapture)" 에 있는 화살표를 터치하여 드롭다운 메뉴에서 활성화된 옵션을 선택합니다. 분석 보기 영역이 많을수록 통계 분석 검정력이 높아집니다. "샘플 분석(Press to run sample)"을 눌러 분석을 시작합니다.
분석이 끝나면 슬라이드가 자동으로 나오고 샘플 탭에 확보한 이미지 분석 데이터가 나옵니다. Green + Red assay 에는 총 세포 농도, 총 Green 양성 세포 백분율, Red 양성 세포 백분율, Green과 Red 양성 세포 백분율, Green과 Red 형광에 모두 음성인 세포 백분율 데이터 결과가 나옵니다. 이 분석에서 녹색으로 계수된 세포는 GFP 양성이고 적색으로 계수된 세포는 PI 양성이어서 세포가 죽었거나 죽어간다고 간주할 수 있습니다.  세포 크기와 Green과 Red 채널의 형광 강도 히스토그램도 표시되고 조절할 수 있습니다. 확보한 보기 영역 이미지 시험을 통해 이 결과를 눈으로 직접 살펴보며 확인할 수도 있습니다. 작지만 강력한 Tali® 이미지 기반 세포분석기는 눈으로 확인할 수 있는 정량 분석법으로 transfection 효율과 생존율을 동시에 평가할 수 있는 이상적인 장치입니다.
Tali™ 이미지 기반 세포분석기에 대한 자세한 정보는 www.lifetechnologies.com/tali에서 확인하실 수 있습니다.

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