Look Who it Was Random video

cDNA 농도를 노멀라이즈 하는 방법 - Ask TaqMan #15

1,060 views · Published 29 August 2013 · 3:16 · Indexed 25 October 2026

Channel: Thermo Fisher Scientific · 2013 · Science & Technology

Watch on YouTube

상대적 유전자 발현연구는 실시간 기기에 수행하는 가장 흔한 어플리케이션 중 하나입니다. 그래서 펜실베이나 주립대학의 Shan에게 이런 질문을 받았을 때에도 놀라지 않았지요. 질문은 "모든 cDNA에 관심 유전자와 내부 대조를 모두 검사해야 한다면 각 cDNA의 농도가 동일해야 합니까?"입니다.  좋은 질문이지요. 잠깐 검토로 시작 해보죠.
유전자 발현 실험을 할 때마다 적어도 두 개의 유전자별 분석이 필요합니다. 하나는 관심 유전자용이고 다른 하나는 내부 대조 유전자용이지요. 이는 "정상화 유전자", "하우스키핑(housekeeping )유전자", "내재 대조 유전자"라고도 합니다. 말은 다르지만 똑같은 의미입니다.
그러면 두 번째 유전자인 정규화 유전자는 우리를 위해 무슨 일을 할까요? 물론 말 그대로 제일 중요한 역할은 넣는 템플릿의 양을 정규화하여 최종 데이터를 만드는 것입니다. 제가 설명하죠. 
관심 유전자 발현을 샘플 두 개 (약물 처리 세포주와 비처리세포주)를 비교한다고 합시다. 리얼타임 결과를 보면 두 샘플에서 Ct값 1이 차이가 나는군요. 이 결과는 두 샘플 간 표적 발현에 2배 차이가 있다는 것을 말해줍니다. 하지만 어떻게 실제로 두배 차이란것을 알 수 있을까요?
결국 미처리 cDNA와 처리 cDNA 농도가 다른 것이 아닐까요? 농도차이가  Ct값 1차이를 만든것 아닐까요? 확실히 가능성이 있습니다. 그렇기 때문에 각 샘플에 정규화 (Normalizer, internal control)유전자를 넣어야 하는 것입니다. 
좋은 정규화 유전자는 여러 샘플 유형에서 발현이 안정적이어서 양이 일정하다고 가정할 수 있는 유전자 입니다. 이 두 번째 유전자를 이용한 분석에서 얻은 데이터 덕분에 샘플마다 주입량이 달라도 cDNA 주입량을 효과적으로 모니터링할 수 있습니다. 그러면 실험 마지막에 정규화 유전자에서 얻은 Ct값을 사용해 cDNA 주입량이 다른 것에 대해 최종 발현값을 보정할 수 있습니다. 그러면 실험에서 항상 샘플간 동일한 양의 템플릿이 있어야 하는것이 아니지요. 
하지만 정규화 유전자가 제역활을 하려면 샘플 세트 전반에서 발현량이 안정적이어야 합니다. 그렇지 않다면 이 정규화 유전자에서 나온 데이터가 오히려 최종 발현값의 덜 정확하게 만들수 있죠. 그러면 어떻게 좋은 정규화유전자를 선택할 수 있을까요?
이 문제에 대해서는 라이프테크놀로지 웹페이지를 방문하셔서 상대적 유전자 발현 작업흐름 문서 사본을 다운받아보실 것을 강력히 추천합니다. 이 PDF 파일에는 추측이 아닌 확실한 실험 데이터를 근거로 가장 적합한 정상화 유전자를 선택할 수 있는 방법에 대한 항이 있습니다.
실시간 PCR에 대해 질문이 있으세요? TaqMan®에게 물어보세요. #askTaqman으로 트위터하거나 페이스북으로 찾아보세요. 아니면 http://lifetechnologies.com/askTaqMan 웹사이트로 오셔도 됩니다.

More from this channel