Look Who it Was Random video

리얼타임 PCR 반응의 민감도를 개선하는 방법 - Ask TaqMan #12

1,349 views · Published 29 August 2013 · 3:29 · Indexed 22 October 2026

Channel: Thermo Fisher Scientific · 2013 · Science & Technology

Watch on YouTube

간질환이나 시상하부를 연구하는 연구자들은 행운이라고 생각해야 합니다. RNA양이 적거나 발현양이 적거나 하지않기 때문이죠.  하지만 micro dissection된 마우스 종양 샘플, 심지어 단일세포로 연구를 하는 사람은 어떨까요? 또 제한된 세포 분리 분획에서 연구를 하는 사람은요? 바레토스 암병원(Barretos Cancer Hospital)의 Andre같은 사람은 이렇게 말합니다. "매우 적은사람 세포에서 전사된 특정 유전자에서 돌연변이를 연구하고 있습니다. 리얼타임 PCR assay 민감도를 높이려면 어떻게 해야 하나요?"  Andre, 제가 답변해드릴 수 있겠네요.
가능한 솔루션을 말하기 전 방금 언급한 두 가지 문제를 시나리오와 함께 이야기 해보겠습니다.  첫번째는 적은 세포양으로 시작할 때에는 RNA 손실의 우려 입니다. 컬럼 정제나 핵산 침전이 포함된 일반적인 분리와 클린업 방법을 사용을 원한다면 샘플이 손실되는 위험이 있습니다. tRNA같은 캐리어 (carrier)를 추가할 수 있겠지만 이것도 회수율을 보장할 수 없습니다.
그럼 어떤 방법이 있을까요? 네, 좋은 방법 하나는 배양된 세포나 미세해부된 샘플의 경우에는 직접 용해를 적용 하는거죠. 
세포를 5분간 용해하여 용액에 RNA를 방출하고 2분간 반응을 정지시킨 후 용해액을 직접 역전사반응에 넣는 것이지요. 이러면 RNA 가 소실되지 않습니다. 마지막으로 이렇게 나온 cDNA 유전자를 리얼타임 반응을 시킵니다.
하지만 이렇게RNA 전부를 살려도 시작량이 제한적이거나 표적 유전자 발현이 미미한 경우에 우수한 리얼타임 신호를 얻지못하는 경우는 어떻게 할까요? 이 경우에는 전처리증폭 단계가 매우 유용할 수 있습니다. 바로 RT 단계 후 다운스트림에서 조사할 표적 특정 프라이머를 사용해 관심 표적을 전처리증폭할 수 있습니다.
 최대 100쌍의 프라이머 풀과 특수 리얼타임PCR 마스터믹스을 사용하여 전처리 증폭을 하게되며 대략 10-14cycle정도 입니다. 
 제한된 clycle로서 여러 표적cDNA의 화학양론을 유지할 수 있으며 유전자 정량 정보가 필요한 연구자에게 매우 중요합니다. 동시에, 희석에 충분한 cDNA를 얻을수 있고 수많은 리얼타임PCR 반응을 수행할 수 있습니다. 라이프 테크놀로지스는 물론 이 프로세스의 모든 단계에 필요한 분리 키트, 증폭 시약 그리고 전사별 분석 모두를 제공합니다. 더 많은 정보를 원하신다면 lifetechnologies.com에서 "cells-to-ct"를 검색해보세요. 사전 증폭용과 아닌 것, mRNA용이나 microRNA용 등 TaqMan과 SYBR 화학 키트를 비롯하여 수많은 키트 옵션이 있습니다.
실시간 PCR에 대해 질문이 있으세요? TaqMan®에게 물어보세요. #askTaqman으로 트위터하거나 페이스북으로 찾아보세요. 아니면 http://lifetechnologies.com/askTaqMan 웹사이트로 오셔도 됩니다.

More from this channel